ELISA數據處理

作為整個ELISA實驗的最后一步，檢測結果的計算對于整個實驗十分重要。

以夾心法ELISA的數據處理為例。

1.ELISA的樣本通常要設置1~2個復孔進行檢測，這樣才能為結果的統計驗證提供足夠的數據。分別求出標準品、實驗組樣本的吸光度的平均值。復孔檢測結果的變異系數（CV）不應超出20%。

2.建立標準曲線。每個標準品和樣本的OD值（吸光度）平均值要減去標準品濃度為0時的OD平均值，以標準品濃度作橫坐標、OD值作縱坐標，擬合曲線。

通常酶標儀會配置相應數據處理軟件，具有豐富的曲線擬合選項。如條件不具備，標曲的建立建議使用相關計算機程序來完成，如GraphPad Prism、Origin、Excel等。

下圖展示了一條具有代表性的標準曲線，數據來自QuantiCyto® Human IFN-γ ELISA（EHC102g.96.）。

注：本圖僅供參考，應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本中人IFN-γ的含量。

3.根據擬合的標準曲線，通過待測樣品的OD值計算出樣本的濃度。若樣品經過稀釋，須乘以相應的稀釋倍數。

4.對于OD值落在標準曲線范圍外的樣品，為獲得準確的結果，需排查可能存在的問題。

（1）待測樣品的OD值低于標準曲線的最-低值，建議設置陽性對照孔來排查，用明確表達的樣品作為陽性對照，如果標準曲線及陽性樣品均可測得正常的表達濃度，則表明實驗成功，。可進一步排除其他原因，比如待測樣品是否稀釋倍數過高，這樣可以通過降低稀釋倍數進行改善。如果使用原液檢測還檢測不出，則表明該指標在其余待測樣品中表達含量低于試劑盒的檢測靈敏度。這種情況對于正常血清/血漿樣本中的炎癥因子較為常見。

（2）待測樣品的OD值高于標準曲線的最高值，應適當稀釋后重新檢測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。

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