MycoStrip™—細(xì)胞支原體污染檢測技巧

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中一個主要的污染問題，能夠嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性和有效性。InvivoGen公司憑借40多年為科學(xué)界開發(fā)支原體解決方案的經(jīng)驗(yàn)，開發(fā)了簡單可靠的檢測細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染的MycoStrip™試劑盒，基于等溫PCR的技術(shù)檢測支原體污染，在5分鐘內(nèi)就能于免疫層析試紙條上快速顯示結(jié)果。如需購買該產(chǎn)品，請聯(lián)系Invivogen代理商欣博盛生物。

支原體屬于柔膜菌綱，其成員特征為缺乏細(xì)胞壁以及擁有多變的形態(tài)。支原體對包括原代細(xì)胞在內(nèi)的所有真核細(xì)胞類型具有高度傳染性。成百上千的支原體可以附著在一個細(xì)胞上，與細(xì)胞膜融合、繁殖，最終數(shù)量可以超過培養(yǎng)細(xì)胞1000倍。支原體沒有細(xì)胞壁的特點(diǎn)使它們對常用的抗生素（如青霉素和鏈霉素）產(chǎn)生抗性。 此外，它們的尺寸微小（~100 nm），能夠穿透過 0.2 μm 的標(biāo)準(zhǔn)過濾膜。支原體與宿主細(xì)胞競爭營養(yǎng)素和代謝物前體，它們能改變許多細(xì)胞功能，影響到細(xì)胞代謝和細(xì)胞生長，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此，我們需要采取預(yù)防措施來防止細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染。

目前的支原體檢測方法大多費(fèi)時費(fèi)力。Japanese cell bank驗(yàn)證了由InvivoGen開發(fā)的基于等溫PCR的支原體快速檢測試劑盒MycoStrip的有效性，并將其檢測靈敏度與其他檢測方法進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)中，將M. hyorhinis支原體(NBRC 14858)加入到VERO細(xì)胞(JCRB0111)中進(jìn)行培養(yǎng)，稀釋后的樣品分別用MycoStrip、生物發(fā)光法(Bioluminescence assay)、熒光染色法(Fluorescent staining)和Nested-PCR進(jìn)行檢測。經(jīng)證實(shí)，MycoStrip的靈敏度與熒光染色的靈敏度相當(dāng)，顯示出足夠的檢測效率證明了基于等溫PCR的MycoStrip是一種簡單且高度通用的支原體檢測方法，因?yàn)樵摍z測方法不需要特殊設(shè)備，將試劑與樣品混合并滴在試紙上即可輕松快速地獲得結(jié)果。MycoStrip可普遍用于支原體污染的常規(guī)檢測。

MycoStrip™ 優(yōu)勢

• 簡單：只需要一個加熱塊

• 快速：2—5分鐘內(nèi)顯示結(jié)果

• 輕松解讀：試紙條上出現(xiàn)一或兩條條帶

• 最少的操作時間：<15分鐘

• 總檢測時長：<1小時

• 靈敏度高：檢測限低至1 x 102 CFU/ml

• 特異性高：無交叉反應(yīng)

• 穩(wěn)定：試劑盒可在-20°C下保存1年

使用MycoStrip™檢測支原體

MycoStrip™專門設(shè)計(jì)用于檢測最常污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體和無膽甾原體，其中包括導(dǎo)致95%細(xì)胞培養(yǎng)污染的六個物種。重要的是，使用MycoStrip™不會與任何其他細(xì)菌、真菌或哺乳動物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

4 個簡單步驟檢測細(xì)胞培養(yǎng)物中的支原體

50 和100 strips的規(guī)格還可以提供不帶卡殼的形式，更經(jīng)濟(jì)、環(huán)保。

產(chǎn)品組份

結(jié)果示例

常見問題

1. 如果支原體檢測呈陽性怎么辦？

InvivoGen有解決方案！可以使用InvivoGen全面的抗支原體試劑清除和預(yù)防污染。推薦用Plasmocin™ 或Plasmocure™ ，治療完成后（約2周），使用MycoStrip™重新檢測。 

2. 收集的待測上清液中含有一些細(xì)胞，會干擾檢測嗎？

無需擔(dān)心，哺乳動物細(xì)胞DNA的存在不會影響檢測分析。 

3. 樣品制備過程中，將樣品加熱到95°C是否有好處？

敏感度沒有提高，但此步驟可以殺死支原體，避免接觸活的支原體。

4. 是否每次使用MycoStrip™時都需要設(shè)立陽性和陰性對照？

包括陽性和陰性對照的定期監(jiān)測，對于結(jié)果的可靠性以及故障排除很重要。

5.在什么階段可以凍存樣品以供后續(xù)檢測分析？

可以按照以下方式儲存樣本：

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清液：在開始“樣品制備"方案之前，可以將上清液儲存在-20°C直到需要使用時。使用前，將樣品在37°C下完-全解凍，渦旋充分混勻以確保所有鹽溶解。

• 已制備的樣品：執(zhí)行“樣品制備"方案的步驟1-4之后，可以將樣品存儲在-20°C直至需要使用時。 

• 處理過的樣品：執(zhí)行“檢測分析"方案的步驟1-4之后，處理過的樣品在-20°C下最多保存3個月。

6. 有一個樣本的測試帶模糊，不能確定是否應(yīng)將其視為支原體污染的陽性結(jié)果？

如果其中一個樣品上觀察到一條微弱的條帶，可以認(rèn)為這是支原體污染的陽性結(jié)果。建議使用以下方法確認(rèn)此結(jié)果： 

• 濃縮樣品：使用更大體積的上清液并重復(fù)“樣品制備"方案中步驟2-3。使用MycoStrip™重新檢測濃縮后的樣品。

• 在使用MycoStrip™重新檢測之前，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞48小時。

• 使用無菌水（不含核酸酶）替代PBS重懸樣品，以提高檢測的靈敏度。

7. 實(shí)驗(yàn)室中沒有熱循環(huán)儀，可以使用什么代替？

可以使用校準(zhǔn)過的加熱塊或水浴代替。請注意，使用水浴可能會引入新的污染源。 

8. 如果將準(zhǔn)備好的樣品在加熱塊上放置了一個多小時，是否仍然能使用該樣品？

在65°C下孵育40分鐘以上會顯著影響檢測結(jié)果，因此不建議繼續(xù)使用此樣品。

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