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        CAR-T細胞基因轉導

        更新時間:2023-02-01   點擊次數:790次

        轉染試劑


        穩定轉染是效應T細胞穩定表達CAR的前提。目前用于CAR-T的基因轉導的方法主要有逆轉錄病毒轉導、慢病毒轉導和mRNA轉染。

        Mirus公司的TransIT-VirusGEN®轉染試劑可提高載體轉染到貼壁或懸浮HEK 293細胞的效率,并有效提高重組腺相關病毒和慢病毒的產量。除了科研級別,Mirus還推出了臨床前級別的TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent。TransIT-VirusGEN®SELECT轉染試劑優于PEI和PEIpro®試劑,是臨床前和早期臨床試驗中大規模病毒生產的理想選擇。Mirus也計劃推出GMP級別的TransIT-VirusGEN®轉染試劑。


        產品優勢:


        高效 — 實現高滴度病毒大規模生產中DNA高效轉染

        驗證 — 經測試確認配方特性,無菌、低內毒素水平、無支原體

        靈活 — 可與不同的重組病毒平臺和細胞培養系統兼容

        安全 — 完quan合成的配方,無動物來源成分


        CAR-T細胞基因轉導

        分別使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (3:1, vol:wt), 25 kDa PEI (4:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1, Polyplus Transfection)將第三代載體pLKO.1-puro-CMVTurboGFP™和ViraSafe™ Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, Cell Bio Labs)( 3:0.5:0.5:2 DNA ratio, 1 μg/ml total plasmid DNA)轉染至FreeStyle™ F17培養基中懸浮培養的FreeStyle™ 293-F細胞(A)和DMEM + 10% FBS中培養的貼壁293T/17細胞(C)生產慢病毒。用含病毒的上清液轉導293T/17細胞,并在轉導 ® 72小時后用Guava Easycyte™ 5HT流式細胞儀檢測GFP表達情況。

        CAR-T細胞基因轉導

        分別使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (2:1, vol:wt), 25 kDa PEI (2:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1 or 4:1, Polyplus Transfection)將pAAV-hrGFP, pAAV-RC和 pAAV Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 1.5 μg/ml plasmid DNA, Agilent Technologies)轉染 至FreeStyle™ F17培養基中懸浮培養的FreeStyle™ 293-F細胞(B)及DMEM + 10% FBS中培養的貼壁293T/17細胞(D)生產腺相關病毒2型(AAV2)。用收集的病毒轉導HT ® 1080細胞,轉導48h后用Guava easyCyte™ 5HT流式細胞儀檢測GFP表達情況。慢病毒和AAV的功能滴度都是根據GFP陽性細胞少于20%的病毒稀釋度計算的。

        TransIT-VirusGEN SELECT在懸浮和貼壁細胞培養系統中優于25 kDa線性PEI和PEIpro 轉染試劑


        品牌產品編號產品名稱規格
        MirusbioMIR 6700TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent1.5 ml
        MirusbioMIR 67030.3 ml
        MirusbioMIR 67040.75 ml
        Mirusbio

        MIR 6705

        5x1.5 ml
        MirusbioMIR 670610x1.5 ml
        MirusbioMIR 6730TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent 30 ml

        美國品牌Cellbiolabs可提供一系列用于病毒表達、病毒包裝、病毒濃縮和純化、病毒滴度檢測的研究工具。


        病毒純化試劑盒


        品牌
        產品編號產品名稱規格產品特點
        Cell BiolabsVPK-5112PureVirus™ Adenovirus Purification Kit10 preps操作時間小于2小時,無需超速離心,回收率>60%~70%
        Cell BiolabsVPK-099ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit10 preps使用特殊離心柱,操作時間小于2小時,回收率>90%
        Cell BiolabsVPK-140ViraBind™ AAV Purification Kit10 preps

        用于純化AAV-2與AAV-DJ,3小時內獲得純度>95%的AAV病毒

        Cell BiolabsVPK-140-T2 preps
        Cell BiolabsVPK-141ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
        2 preps用于純化AAV-2與AAV-D,J 3小時內獲得純度>95%的AAV病毒,回收率>60%
        Cell BiolabsVPK-141-510 preps


        病毒滴度檢測試劑盒


        品牌產品編號產品名稱規格產品特點
        Cell Biolabs

        VPK-107

        VPK-107-5

        VPK-107-T


        QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit 

        (Lentivirus-Associated p24 ELISA)

        96 assays

        5x96 assays

        32 assays

        專li技術將慢病毒相關p24蛋白與游離p24蛋白分開,避免傳統方法檢測總P24蛋白導致的誤差
        Cell BiolabsVPK-112QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit20 assays

        快速定量,操作過程45~60分鐘

        可檢測純化前或純化后病毒核酸濃度

        Cell BiolabsVPK-120QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit20 assays

        快速定量,操作過程45~60分鐘

        可檢測純化前或純化后病毒核酸濃度來定量病毒滴度


        Cell BiolabsVPK-110QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit2x96 assaysELISA方法,無需空斑形成實驗,避免復雜的鋪瓊

        脂步驟,操作更簡便,耗時更短

        Cell BiolabsVPK-109

        VPK-109-T

        QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit

        100 assays

        20 assays

        免疫細胞化學方法,無需空斑形成實驗,避免復

        雜的鋪瓊脂步驟,操作更簡便,耗時更短

        Cell BiolabsVPK-106QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit20 assays

        快速定量,操作過程45~60分鐘

        可檢測純化前或純化后病毒核酸濃度來定量病毒滴度

        Cell BiolabsVPK-145QuickTiter™ AAV Quantitation Kit20 assays快速定量,操作過程小于2小時


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